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选购可见分光光度计,应重点考虑哪些事项?

更新时间:2023-05-18浏览:645次

   分光光度计,简称光度计,又称光谱仪,已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

  分光光度计测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。根据可测量波长范围的不同,分光光度计常分为:紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。今天搜科采购管家重点为您介绍的是可见分光光度计的选购注意事项。
  按照惯例,在选购仪器之前我们先要摸清自己的需求:
  你们实验室使用分光光度计的常规应用有哪些?
  你们对分光光度计的灵敏度有何要求?
  是否多人共用一台分光光度计?
  是否需要同时测量多个样品?
  要测量样品的体积范围是怎样的?
  对分光光度计的使用频率和使用时长是怎样的?
  以上问题的答案,可能会影响您对可见分光光度计的功能要求、灵活性要求、带宽要求,是否需要预设程序等智能功能等等。如果使用频率高、时间长,对产品的质量和耐久性就有比较高的要求。
  带着这些问题,我们来看看可见分光光度计产品都有哪些功能和特点,其中又有哪些是选购时必须考虑的硬性指标。
  1、仪器的原理和主要部件
  分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
  其工作原理是:
  分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收。样品对光的选择性吸收波长,以及相应的吸收系数是该样品的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液,测定其吸收度,即可计算出供试品中该物质的含量。在可见光区,除某些物质对光有吸收外,很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。
  从以上原理,可以引出分光光度计最重要的配件——比色杯。
  比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。
  2、分光光度计的常见用途
  可见分光光度计是在可见光区域内对物质做定性、定量分析。常见的用途有以下几种:
  (1)比色法蛋白质定量
  比色法的测定原理是组成蛋白质的氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
  (2)核酸的定量
  核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。
  (3)OD600细菌细胞密度
  实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。
  3.性能参数指标
  (1)波长
  波长范围、波长查找方式、波长的准确度和重复性都是需要考虑的重要指标。
  波长涵盖范围越大越好,自动查找比手动查找好,所示波长和实际波长越符合越好。
  (2)带宽
  分光光度计的带宽很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。狭缝宽度参数,以及狭缝宽度是固定的还是连续可选的,都代表着该仪器的性能。
  (3)能测量的样品量
  样品量也是重要的考量因素。如果比色杯容量太大,那测量珍贵样品时是非常浪费的。现在很多光度计的样品量都趋于微量化了。
  (4)光度准确度
  光度准确度指实际测量的光度读数值与真值之差。肯定是准确度越高越好。
  (5)杂散光
  杂散光是光谱测量中误差的主要来源。杂散光越小越好。
  (6)稳定性
  稳定性是精密测量仪器的硬性指标,测量结果肯定是越准确、越稳定越好。
  (7)噪声
  噪声肯定是越小越好,这个不用解释。
  (8)仪器的大小
  很多实验室空间有限,满足使用要求的基础上,仪器肯定是占地面积越小、重量越轻越好。

 

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